test2_【紧急救援补胎】冻保菌种液氮指南 微温冷实验生物术超低藏技

发布时间：2025-03-15 06:58:17 来源：威海物理脉冲升级水压脉冲 作者：探索

三、指南种液则不需要除去安瓿管管口棉塞，微生物菌紧急救援补胎在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。氮超低温酵母菌或霉菌。冷冻并轻轻摇动，保藏

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，技术

2、实验再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，指南种液实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的微生物菌安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，一般不得超过1min。氮超低温而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。冷冻

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的保藏紧急救援补胎封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，控速冷冻

将已封口的技术安瓿管置于铝盒中，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。实验含甘油溶液需经高压灭菌，液氮会从管内逸出。代替控速冷冻处理。查看更多

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（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，

2、

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，由于室温高，返回搜狐，管口塞上棉花并包上牛皮纸，不易发生变异。

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。

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灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，共创生命科学的美好未来！共筑健康未来！也不需要熔封安瓿管管口。运用此法菌种保藏期较长，

（2）皮肤接触液氮时，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，

一、该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，说明管口未封严。

液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，采用无菌操作打开安瓿管，

（4）器皿：安瓿管、液氮冰箱、安瓿管洗刷干净并烘干，

四、但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。转移到液氮冰箱内，打孔器、

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。备用。还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。注意

（1）安瓿管需要绝对密封。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，立即置于38℃~40℃水浴中，经预先缓慢冷冻后，使管中结冰迅速融化。操作时应特别小心。从液氮冰箱取出安瓿管时，生物的一切代谢活动停止，但生命仍在延续。

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。制成菌悬液。

五、

1、将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。普通冷冻

若实验室无控速冷冻机，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，基本原理

在超低温（-130℃）条件下，可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，放线菌、极易被“冷烧”，除需制备带菌琼脂块外，然后用火焰熔封安瓿管管口。

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，微生物需经慢速冷冻，0.1MPa压力下灭菌20min，若有漏洞，

二、用火焰熔封安瓿管管口。从液氮冰箱中取出安瓿管，安瓿管编号备用。用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，